HyCyte成人骨髓間充質干細胞

Human Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells（H BMSCs）

HyCyte成人骨髓間充質干細胞 取自18-45歲成人骨髓，傳代擴增至第二代凍存。本產品經生物安全檢測，無細菌、真菌、霉菌、支原體和病毒污染，表達多種人源間質干細胞特異性標記，具有良好的增殖和分化潛能，可分化為成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞等。

細胞名稱：成人骨髓間充質干細胞

細胞簡稱：H MSC

產品貨號：BMHX-C106

種屬來源：人

規格：1× 10^6 cells/Vial

組織來源：骨髓

細胞形態：成纖維細胞樣

生長特性：貼壁生長

配套培養基貨號：BMHX-G101

傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

傳代周期：48-72 h

培養條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條件：60%基礎培養基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲存

質量檢測：細菌、真菌、支原體檢測均為陰性

毒素檢測：＜10 EU/mL

參考文獻：

Bartsch T,Falke T , Brehm M. Intra-arterial and intrarnuscular transplanta-tion of adult , autologous bone marrow stem cells. Novel treatment for thera-py refractory peripheral arterial occlusive disease[ J]. Dtsch Med Wochen-schr ,2006 ; 131(3):79-83.

Sohara Y , Shimada H , Minkin C,et al.Bone marrow mesenchymal stemcells provide an alternate pathway of osteoclast activation and bone de-struction by cancer cells[ J]. Cancer Res , 2005 ;65(4):1129-35.

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Iso Y, Spees JL,Serrano C,et al.Multipotent human stromal cells improve cardiac function after myocardial infarction in mice without long-term en-graftment[J].Biochem Biophys Res Commun ,2007;354(3):700-6.5

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| 收貨后處理方法

收到細胞后請檢查包裝是否完整，干冰是否充足，凍存管有無破損，并核對管身標簽信息和數量，

確認是否與裝箱單一致。如有異常情況，請及時與我們聯系。

如不立即進行實驗，請將細胞放至-80℃或液氮中保存。

| 產品描述

蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司提供的間充質干細胞取自成人骨髓，經檢測，確保細胞無細菌、真菌、支原體和病毒污染，表達多種間充質干細胞特異性表面標記，具有良好的增殖和分化潛能，經定向誘導，可分化為脂肪細胞、成骨細胞、成軟骨細胞等。

凍存代次： P2

培養體系： HyCyteTM成人骨髓間充質干細胞培養基（Cat. BMHX-G101）

換液時機： 發現有比較多的死細胞或培養基顏色較黃時，應換液。一般為每 2-3 天換液

傳代比例： 一般為 1:2

傳代周期： 細胞匯合度達 80%~90%時，可進行傳代，一般為 48~72 h，

不可讓間充質干細胞融合或過度融合，以免發生生長接觸抑制，影響細胞的生長狀態。

培養條件： 氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條件： 海星一步凍存液 HyCyteTM One Step Freezing Medium（Cat. GUCP-R201）

NOTE：該產品僅供科研使用，不可用于其他方面。

使用說明書：

| HyCyteTM H BMSCs 的復蘇

1) 實驗前開啟水浴鍋預熱培養基。

2) 在工作臺中準備好 15 mL 離心管加入 5 mL預熱后的培養基。

3) 從-80°C 冰箱中取出凍存管，將凍存管置于37℃水浴鍋內，快速搖動解凍直到內容物融化，同時需注意避免水面沒過管口。

NOTE：建議將液氮中的細胞提前取出置于-80°C 待液氮揮發后復蘇。

4) 對凍存管外壁進行常規消毒后，在工作臺內小心開蓋，盡量避免氣泡溢出，輕柔吹打數次，轉移至 15 mL 離心管內。使用 1 mL 培養基

清洗凍存管內壁，一并收集至 15 mL 離心管內。

5) 250 g 離心 5 min，收集細胞沉淀，棄掉上清并加入 2 mL 培養基重懸（如有臺盼藍可取少量進行染色計數）。

6) 將重懸后的細胞接種至 T25 或同等底面積器皿，“劃十字"搖晃細胞培養器皿，使細胞均勻分布。把細胞放入 37°C，5%CO2，飽和濕度的培養箱中培養。

7) 24h 后鏡下拍照觀察，換液后繼續培養。如有異常情況，請及時與我們聯系。

| HyCyteTM H BMSCs 的傳代

1) 預熱 1×PBS、胰酶和培養基。

2) 吸去原培養基。用 1×PBS 洗滌細胞 2~3 次。

3) 吸去 1×PBS。加入胰酶。輕輕旋轉，使胰酶 覆蓋細胞表面，消化，顯微鏡下觀察約 70%~80%左右的細胞變圓后，用手輕拍培養 器皿外壁使細胞脫壁。

4) 當觀察到細胞明顯脫落，立即加入預熱的培養基終止消化。用吸管吸取液體，反復輕 柔吹打培養器皿底壁，使細胞脫離器皿底壁。

NOTE：建議可添加 2 倍胰酶用量的完培用于 終止消化。

5) 將細胞懸液轉移到離心管中。用 1xPBS 清洗 底壁，收集細胞懸液至離心管中。

6) 250 g 離心 5 min。

7) 小心棄去上清液，加入 1~2mL 完培重 懸細胞。

8) 選擇合適的培養器皿，加入適量完培， 按照合適的傳代比例（一般為 1:2）接種細胞,“劃十字"搖晃細胞培養器皿，使細胞均勻分布。

9) 把細胞放入 37°C，5%CO2，飽和濕度的培養 箱中培養。

HyCyteTM H BMSCs 的凍存

1) 待細胞生長至可傳代的匯合度，即可消化準備 凍存。

2) 消化細胞，取少量細胞懸液計數。細胞懸液經 250 g離心5 min。

3) 小心棄掉上清。用4°C預冷的凍存液重懸細胞， 一般凍存密度為1×10^6個/mL。

4) 對凍存管進行標識后，把細胞分裝到凍存管中， 旋緊凍存管蓋。

5) 如使用HyCyteTM海星一步凍存液，凍存管直接 豎直放入-80°C冰箱即可。 如使用程序凍存液，需將凍存管放入程序降溫 盒后方可放入-80°C冰箱。

6) 24小時后可將細胞轉移到液氮進行長期保存。